AAV Titration ELISA Kit
· 隨著以AAV為載體的基因治療市場(chǎng)的快速發(fā)展，監(jiān)管部門對(duì)AAV藥物QC檢測(cè)要求越來越高，為了確保AAV藥物的安全性和有效性，需要有效、可靠、穩(wěn)定的AAV藥物顆粒滴度定量方法。
· 目前AAV顆粒滴度定量的方法有很多，包括紫外吸光法、ELISA和HPLC等，每種方法都有各自的優(yōu)缺點(diǎn)，其中ELISA因其重現(xiàn)性高、特異性好等特點(diǎn)而得到了廣泛的應(yīng)用，這也是監(jiān)管部門所建議的滴度測(cè)定方法之一。
愷佧生物為此開發(fā)了一系列不同血清型的AAV(2/5/6/8/9)滴度ELISA檢測(cè)試劑盒，為AAV顆粒滴度的定量提供準(zhǔn)確、可重復(fù)、穩(wěn)定可靠的結(jié)果。
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
產(chǎn)品數(shù)據(jù)
以AAV9 Titration ELISA Kit為例展示性能數(shù)據(jù)
01 標(biāo)準(zhǔn)曲線
Fig. 1 擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，本試劑盒的定量范圍為：2.03E+07-1.30E+09 capsids/ml。
02 特異性
ELISA間接法檢測(cè)不同濃度的AAV9抗體與AAV2/5/8/9交叉結(jié)合，以檢測(cè)抗體的濃度為橫坐標(biāo)，OD450值為縱坐標(biāo)繪制曲線。ELISA夾心法檢測(cè)AAV9抗體與完整AAV9以及變性AAV9的結(jié)合，以檢測(cè)抗體的濃度為橫坐標(biāo)，OD450值為縱坐標(biāo)繪制曲線。
Fig. 2 AAV9檢測(cè)抗體與AAV2/5/8/9交叉結(jié)合，結(jié)果顯示AAV9檢測(cè)抗體只特異性結(jié)合AAV9，并不會(huì)交叉結(jié)合AAV2/5/8。
Fig. 3 AAV9檢測(cè)抗體與變性AAV9結(jié)合檢測(cè)，結(jié)果顯示AAV9檢測(cè)抗體不結(jié)合變性的AAV9衣殼。
03 準(zhǔn)確度
使用同一試劑盒測(cè)試高中低三個(gè)不同滴度AAV9樣本在稀釋緩沖液中的加樣回收率。
Fig. 4 在稀釋緩沖液中檢測(cè)不同滴度AAV9樣本的加樣回收率均介于80%-120%，表明本試劑盒檢測(cè)AAV9滴度的準(zhǔn)確度高。
04 精密度
使用同一批次試劑盒對(duì)高中低三種不同滴度AAV9樣本進(jìn)行檢測(cè)，每個(gè)樣本重復(fù)檢測(cè)10次，計(jì)算這10次滴度檢測(cè)的平均值(M)和標(biāo)準(zhǔn)差(SD)，計(jì)算變異系數(shù)(CV)。
如Table 1所示，試劑盒檢測(cè)高中低三種不同滴度AAV9樣本的CV均小于10%，表明試劑盒的AAV9滴度定量結(jié)果具有良好的批內(nèi)重復(fù)性。
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